核纤层蛋白B1通过影响端粒酶活性调控肝癌细胞生长

核纤层蛋白B1(nuclear lamina protein B1,LMNB1)高表达于肝癌组织中,通过敲低LMNB1探讨其对肝癌细胞增殖的影响及其机制。利用siRNA在肝癌细胞中敲低LMNB1,Western blotting检测敲低效果,使用端粒重复序列扩增法(telomeric repeat amplification protocol assay,TRAP)检测其端粒酶活性变化。利用实时定量聚合酶链反应(quantitative real-time polymerase chain reaction,qPCR)检测其端粒长度变化。并通过CCK-8、克隆形成、Transwell、划痕实验检测其生长,侵袭和迁移能力变化。利用慢病毒系统构建稳定敲低LMNB1的HepG2细胞,检测其端粒长度及端粒酶活性变化,采用SA-β-gal衰老染色检测细胞衰老情况,通过裸鼠皮下成瘤实验及对肿瘤后续的组化染色,SA-β-gal衰老染色,端粒荧光原位杂交(fluorescence in situ hybridization,FISH)检测其对成瘤性的影响。最后利用生物信息分析的方法寻找LMNB1在临床肝癌组织中的表达情况,及其与临床分期、病人生存期的关系。HepG2和Hep3B中敲低LMNB1后端粒酶活性显著降低,细胞增殖、迁移和侵袭能力显著降低,细胞和裸鼠成瘤实验证明稳定敲低LMNB1后端粒酶活性降低的同时端粒长度缩短,细胞发生衰老,此外细胞成瘤性降低,Ki-67表达降低,生物信息分析结果显示,LMNB1高表达于肝癌组织,且与肿瘤分期和患者生存相关。LMNB1在肝癌细胞中过表达,其有望成为评估肝癌患者临床预后的指标和精准治疗的靶点。     

腹腔镜子宫肌瘤剔除术的临床应用分析

目的:探讨腹腔镜子宫肌瘤剔除术的临床效果及安全性。方法:回顾性分析在我院行腹腔镜子宫肌瘤剔除术的患者68例(实验组)及同期行腹式子宫肌瘤剔除术的患者58例(对照组)的临床资料,比较其临床表现、术中出血量、手术时间,术后最高体温、术后应用抗生素时间、住院时间。结果:实验组术中出血量、术后应用抗生素时间、住院平均时间均显著优于对照组(P0.05);手术时间较对照组长(P0.05);两组术后放置引流、术后最高体温比较无差异(P0.05)。多发、直径≥5 cm的肌瘤腹腔镜子宫肌瘤剔除术术中出血、手术时间较单发、直径5 cm的肌瘤(P0.05)显著增加(P0.05),肌瘤部位对术中出血及手术时间无影响(P0.05)。结论:腹腔镜子宫肌瘤剔除术术中出血量少,术后恢复快,术中出血及手术时间与肌瘤类型及大小有关,与肌瘤部位无关,是一种治疗子宫肌瘤安全、有效的术式。     

健康妇女及3例细菌性阴道病患者阴道菌群的非培养分析

根据Amsel标准及Nugent标准, 确诊筛选健康妇女及细菌性阴道病(bacterial vaginosis, BV)患者各3例。提取其阴道分泌物样本的总DNA, 构建16S rRNA基因克隆文库, 并对阳性克隆进行ARDRA和测序分析。结果表明, 健康妇女样本的基因文库中, 分别以卷曲乳酸杆菌(L. crispatus)和惰性乳酸杆菌(L. iners)的克隆子占较大比例, 另外存在少量的阴道乳酸杆菌(L. vaginalis)或詹氏乳酸杆菌(L. jensenii)的克隆子。BV患者样本的基因文库中, 克隆子所代表的菌种类型明显增多, 但均以阴道加德纳氏菌(Gardnerella vaginalis)和阴道阿托波氏菌(Atopobium vaginae)的克隆子占较大比例, 且无乳酸杆菌克隆子。说明健康妇女阴道菌群的种类单一, 以乳酸杆菌占优势, L. iners为优势菌种之一; BV患者阴道菌群的种类复杂多样, 但均以Gardnerella vaginalis及Atopobium vaginae共同占优势。     

人类胚胎干细胞体外诱导分化为神经干细胞

人类胚胎干细胞是替代治疗充满希望的细胞来源. 描述了从人胚胎干细胞诱导分化出神经干细胞的方法. 将人胚胎干细胞系PKU1, PKU2在细菌培养皿中悬浮培养, 分化形成囊性拟胚体. 拟胚体接种至组织培养皿, 加入N2培养液和生长因子bFGF培养2周, 拟胚体贴壁、展开,中心出现灶状增生, 有突起的小细胞. 用机械方法取下此种细胞, 重新接种, 则细胞团悬浮生长,形成神经球. 培养10天后, 将神经球打散成单细胞接种, 该细胞贴壁生长旺盛. 免疫荧光检测显示为几乎100% 纯净的nestin阳性细胞. 将培养液中的生长因子撤除, 继续培养7~10天, 细胞分化为神经元, 该细胞呈现β-tubulin isotype_Ⅲ 阳性、GABA阳性、serotonin阳性、synaptophysin阳性. 在生长因子PDGF-AA诱导下, 细胞分化为星形胶质细胞, 其GFAP阳性; 或少突胶质细胞, 其O4阳性. 可见, 人类胚胎干细胞经上述方法培养可分化为典型神经干细胞, 表达神经干细胞特异的标志分子nestin、能自我更新、具有分化为神经系统三类主要细胞的能力.     

初级纤毛与Wnt信号通路相关性研究进展

初级纤毛是一类以微管为基础结构的细胞器,其来源于细胞的母中心粒,锚定在细胞膜并如“天线”般突出细胞表面。作为细胞感受器,初级纤毛从环境中接受各种信号,传导至细胞内引起细胞反应。近期的研究表明,初级纤毛对与胚胎发育密切相关的Wnt信号通路的传导起重要作用。纤毛的损害可造成Wnt信号通路的异常,并引起胚胎中多类脏器一系列的病理改变,导致初级纤毛相关疾病的发生。文章主要阐述了初级纤毛与Wnt/β-catenin、Wnt/PCP通路及初级纤毛相关疾病之间的关系,并对初级纤毛相关疾病的治疗进行了初步探讨。对初级纤毛与Wnt信号通路关系的深入研究将有助于人们对该类疾病的进一步诊断和治疗。     

评估宫颈微浸润腺癌不同外科治疗的结果

目的:通过大样本的病例回顾,明确宫颈微浸润腺癌需要彻底外科治疗的病变范围。方法:46例因患宫颈微浸润腺癌(浸润深度小于或等于5mm)行外科手术治疗的病人,来自中国人民解放军总医院妇产科,同一位病理专家确定组织学类型、肿瘤分级、浸润深度、肿瘤宽度、有无淋巴管间的浸润、肿瘤边缘状况、宫旁状况以及是否有结节状的转移。病变分级参照FIGO(2009)的标准。结果:46例患者按照现行的FIGO分期标准,34例ⅠA1期,12例ⅠA2期。治疗方式主要有宫颈锥切、单纯全子宫切除、全子宫切除加淋巴结清扫、广泛子宫切除加淋巴结清扫。31例广泛全子宫切除的患者没有发现宫旁浸润。34例行淋巴结清扫的病人没有发现淋巴结转移。平均随访80个月未见复发。结论:关于微浸润腺癌的处理仍旧有争议,相对于微浸润宫颈鳞状细胞癌而言,传统的治疗宫颈微浸润腺癌彻底外科治疗更多一些。通过本次研究,我们认为宫颈为浸润癌基质浸润深度小于3mm或者FIGOIA1期的患者,简单的全子宫切除足够,不需要淋巴结清扫、广泛的子宫切除和卵巢切除。     

腹腔镜早期子宫内膜癌手术临床疗效分析

目的:探讨腹腔镜下早期子宫内膜癌分期手术与开腹手术的临床疗效的差异.方法:回顾性研究2008年1月～2012年10月在我院行子宫内膜癌分期手术的84例患者临床资料,手术病理分期为ⅠA～Ⅱ期.其中腹腔镜分期手术40例,开腹分期手术44例,比较2组手术时间、术中出血量、淋巴结清扫数目、术后胃肠功能恢复时间、并发症、术后住院时间.结果:腹腔镜组手术时间长于开腹组,两者相比具有统计学意义(P＜0.05);腹腔镜组术中出血量显著少于开腹组(P＜0.05);淋巴结清扫总数显著多于开腹组(P＜0.05);腹腔镜组在排气时间、尿管拔除时间、术后出院时间均显著早于开腹组(P＜0.05);两者并发症方面无统计学差异(P＞0.05).结论:腹腔镜分期手术较开腹手术更具微创价值,是治疗早期子宫内膜癌稳妥可行的选择.     

早期宫颈癌患者围手术期外周血淋巴细胞数与其预后的关系

目的:探讨早期宫颈癌患者围手术期外周血淋巴细胞数与其预后之间的关系。方法:回顾性分析2006年1月至2012年12年就诊于解放军总医院,根据2009年最新宫颈癌FIGO指南诊断为Ⅰb~ⅡA期宫颈癌进行阴式宫颈癌根治术患者的临床病历资料。分析患者的围手术期淋巴细胞数和其无瘤生存期、总生存期间的关系。结果:共143例阴式早期宫颈癌根治术患者纳入研究,随访时间为6~87个月,中位随访时间为53个月。术后,宫颈癌患者外周血淋巴细胞数显著下降。术前外周血淋巴细胞数较高的患者无瘤生存期及总生存期均较外周血淋巴细胞数低于平均水平的患者显著延长(P0.05);术后第三天淋巴细胞数恢复或高于术前水平的患者无瘤生存期较术后第三天淋巴细胞数低于术前水平的患者显著延长(P0.05),但总生存期无明显差异(P0.05)。COX回归分析显示术前淋巴细胞数高于平均水平及术后第三天淋巴细胞数高于或等于术前水平的宫颈癌患者的预后相对较好。结论:术前淋巴细胞数和术后第三天淋巴细胞数的变化均可作为评估宫颈癌术后患者预后的重要参考指标。     

长链非编码RNA Dleu2 对宫颈癌细胞增殖、迁移及侵袭的影响

目的:研究长链非编码RNA(long non-coding RNA,lnc RNA)Dleu2对宫颈癌细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响。方法:利用高通量Lnc RNA芯片技术检测10例宫颈癌组织及对应的癌旁组织,筛选得到一批表达水平具有显著差异的Lnc RNA,进一步针对可能具有生物学功能的Lnc RNA-Dleu2,利用q-PCR验证其在癌组织样本中的相对低表达。再通过在细胞内过表达Lnc RNA-Dleu2研究其对宫颈癌Hela和Caski细胞系增殖、迁移和侵袭的影响。结果:q-PCR结果验证了Lnc RNA芯片筛选的结果,即相较于癌旁组织和正常宫颈上皮细胞系,Lnc RNA-Dleu2在宫颈癌组织和细胞中均低表达。CCK8和克隆形成实验结果显示,过表达Lnc RNA-Dleu2能显著抑制Hela和Caski细胞增殖能力(P0.01);细胞划痕实验结果显示,过表达Lnc RNA-Dleu2能显著抑制Hela和Caski细胞增殖和迁移能力;Matrigel细胞侵袭实验结果显示,过表达Lnc RNA-Dleu2能显著抑制Hela和Caski细胞的侵袭能力(P0.01)。结论:Lnc RNA-Dleu2在宫颈癌中相对低表达,提高Dleu2表达水平能够抑制宫颈癌细胞系Hela和Caski的增殖、迁移和侵袭能力。     

健康妇女及3例细菌性阴道病患者阴道菌群的非培养分析

根据Amsel标准及Nugent标准,确诊筛选健康妇女及细菌性阴道病(bacterial vaginosis,BV)患者各3例.提取其阴道分泌物样本的总DNA,构建16S rRNA基因克隆文库,并对阳性克隆进行ARDRA和测序分析.结果表明,健康妇女样本的基因文库中,分别以卷曲乳酸杆菌(L.crispatus)和惰性乳酸杆菌(L. iners)的克隆子占较大比例,另外存在少量的阴道乳酸杆菌(L.vaginalis)或詹氏乳酸杆菌(L.jensenii)的克隆子.BV患者样本的基因文库中,克隆子所代表的菌种类型明显增多,但均以阴道加德纳氏菌(Gardnerella vaginalis)和阴道阿托波氏菌(Atopobium vaginae)的克隆子占较大比例,且无乳酸杆菌克隆子.说明健康妇女阴道菌群的种类单一,以乳酸杆菌占优势,L. iners为优势菌种之一;BV患者阴道菌群的种类复杂多样,但均以Gardnerella vaginalis及Atopobium vaginae共同占优势.